Il est généralement de type rendzine ou brun-calcaire, peu profond (10 à 40 cm), de structure grumeleuse à l'horizon superficiel, et très caillouteux. La présence de cailloux facilite le drainage et le filtrage en sous-sol, et améliore le réensemencement en calcium tout en jouant un rôle protecteur en surface.

La texture doit être limono-argileuse ou sablonneuse de façon à permettre une bonne circulation de l'air et de l'eau. Sa structure doit être équilibrée en éléments minéraux et en matière organique (comprise entre 1,5 et 8%, rapport Carbone / Azote voisin de 10). La composition minérale doit être sans carence ni excès d'aucun élément essentiel.

En conséquence, il est recommandé de faire effectuer une analyse de sol avant plantation.

Le climat: une alternance suffisante mais non excessive des saisons (pluviométrie, humidité de l'air, température, insolation) est favorable. Ainsi sont exclus, en France, les climats de type franchement océanique (doux et peu contrastés), de type continental (été très chaud, hiver très froid, saisons intermédiaires peu marquées), de type franchement méditerranéen (été aride), les climats d'altitude à longue période froide, les conditions climatiques à ensoleillement très faible ou excessif, selon le type de climat régional.

L'altitude: la truffe peut prospérer entre 100 et 1000 m selon les conditions locales, mais la plupart des truffières productives se situent entre 200 et 400 m.

La topographie: la truffe se plaît sur les plateaux et les pentes, jamais en bas-fonds (dolines, dépressions).

Si la truffe est souvent qualifiée de "fruit des terres pauvres, déshéritées, où l'on ne peut rien faire d'autre", sa culture peut néanmoins donner de bons résultats dans des terres agricoles, dites "riches" par comparaison, où l'on aurait pu préférer la vigne ou les fruitiers, ou les céréales, ou d'autres productions. Les techniques culturales y sont souvent plus aisées et les rendements moins aléatoires.

Si des garrigues, des bois, des friches peuvent devenir de bonnes truffières, il a été cependant reconnu de tout temps que la vigne et le lavandin "prépare" la truffière.

En effet, la culture de végétaux n'abritant pas de champignons ectomycorhiziens (vigne, arbres fruitiers, oliviers, lavandins, céréales, plantes fourragères ou oléagineuses...) limite considérablement le potentiel de mycorhizes compétitives vis-à-vis de la truffe.

Il faut absolument éviter de planter sur défriche ou déboisement récent (risque de concurrence de champignons mycorhiziens indésirables). Quelques années de cultures céréalières ou fourragères permettent de partir sur des sols favorables à la truffe. Le choix de la plante-hôte (chêne pubescent, chêne vert ou noisetier) se fera en fonction de son adaptation au sol et à la région.